Việc nghiên cứu vi khuẩn có tầm quan trọng thiết thực đối với con người. Đến nay, một số lượng lớn các sinh vật nhân sơ đã được phát hiện, chúng khác nhau về khả năng gây bệnh, khu vực phân bố, hình dạng, kích thước, số lượng roi và các thông số khác. Để nghiên cứu chi tiết về chủng này, một phương pháp nghiên cứu vi khuẩn được sử dụng.
Các phương pháp phân tích tế bào vi khuẩn là gì?
Để xác định xem vi khuẩn có gây bệnh hay không, việc nuôi cấy được kiểm tra theo nhiều cách khác nhau. Trong số đó:
1. Phương pháp soi cầu vi khuẩn.
2. Phương pháp vi khuẩn học.
3. Phương pháp sinh học.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn và vi khuẩn học dựa trực tiếp vào việc làm việc với tế bào nhân sơ, khi phân tích sinh học được yêu cầu để nghiên cứu ảnh hưởng của các tế bào đó lên cơ thể sống của động vật thí nghiệm. Theo mức độ biểu hiện của một số dấu hiệu của bệnh, nhà khoa học có thể đưa rakết luận về sự hiện diện hay không có vi khuẩn gây bệnh trong mẫu, cũng như nhân giống chúng một cách tự nhiên trong cơ thể động vật để nuôi cấy và sử dụng chúng trong các công việc khác.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học khác với phương pháp vi khuẩn học. Trong lần đầu tiên, một môi trường nuôi cấy tế bào nhân sơ sống được chuẩn bị đặc biệt được sử dụng để phân tích, trong khi trong lần thứ hai, công việc được thực hiện với các tế bào sống hoặc chết trên lam kính.
Các giai đoạn của phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học. Vi sinh
Nguyên tắc nghiên cứu các đặc tính của môi trường nuôi cấy vi khuẩn có thể hữu ích cho cả các nhà vi sinh vật học đặt mục tiêu nghiên cứu tế bào nhân sơ và cho các kỹ thuật viên phòng thí nghiệm có nhiệm vụ thiết lập khả năng gây bệnh hoặc không gây bệnh của vi khuẩn, và sau đó chẩn đoán cho bệnh nhân.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn được chia thành ba giai đoạn:
1. Phân lập vi khuẩn từ mẫu ban đầu.
2. Gieo vi khuẩn và nuôi cấy thuần túy, nghiên cứu các đặc tính của nó.
3. Nghiên cứu chi tiết về tế bào vi khuẩn.
Giai đoạn đầu
Mẫu, hoặc vết bôi, được lấy từ bề mặt tự do của môi trường hoặc từ bệnh nhân. Như vậy, chúng ta có được một “ly cocktail” gồm nhiều loại vi khuẩn phải gieo trên môi trường dinh dưỡng. Đôi khi có thể cô lập ngay lập tức các vi khuẩn cần thiết, biết được các ổ phân bố của chúng trong cơ thể.
Sau hai hoặc ba ngày, các khuẩn lạc mong muốn được chọn vàđược gieo trên môi trường rắn của đĩa Petri với sự trợ giúp của vòng vô trùng. Nhiều phòng thí nghiệm làm việc với các ống nghiệm, có thể chứa môi trường dinh dưỡng rắn hoặc lỏng. Đây là cách phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học trong vi sinh vật học được thực hiện.
Giai đoạn thứ hai
Sau khi thu được các khuẩn lạc riêng lẻ của vi khuẩn, tiến hành phân tích vi mô và vĩ mô trực tiếp. Tất cả các thông số của khuẩn lạc được đo, màu sắc và hình dạng của từng khuẩn lạc được xác định. Không hiếm khi đếm khuẩn lạc trên đĩa Petri và sau đó trong nguyên liệu ban đầu. Điều này rất quan trọng trong việc phân tích vi khuẩn gây bệnh, số lượng vi khuẩn này phụ thuộc vào mức độ của bệnh.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học, giai đoạn thứ 2 là nghiên cứu các khuẩn lạc riêng lẻ của vi sinh vật, có thể được kết hợp với một phương pháp sinh học để phân tích vi khuẩn. Một mục tiêu khác của việc làm ở giai đoạn này là tăng lượng nguyên liệu gốc. Điều này có thể được thực hiện trên môi trường dinh dưỡng, hoặc bạn có thể tiến hành một thí nghiệm in vivo trên các sinh vật thí nghiệm sống. Vi khuẩn gây bệnh sẽ nhân lên và kết quả là máu sẽ chứa hàng triệu tế bào nhân sơ. Thật dễ dàng để chuẩn bị vật liệu làm việc cần thiết của vi khuẩn từ máu được lấy.
Giai đoạn thứ ba
Phần quan trọng nhất của nghiên cứu là xác định các đặc tính hình thái, sinh hóa, độc tố và kháng nguyên của môi trường nuôi cấy vi khuẩn. Công việc được thực hiện với các mẫu cấy đã được làm sạch trước trên môi trường dinh dưỡng, cũng như với các chế phẩm (thường được nhuộm màu) dưới kính hiển vi.
Đặt quyền sở hữuvi khuẩn gây bệnh hoặc cơ hội đối với một hoặc một nhóm có hệ thống khác, cũng như để xác định khả năng kháng thuốc của chúng, cho phép phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học. Giai đoạn 3 - thuốc kháng sinh, tức là phân tích hành vi của tế bào vi khuẩn trong điều kiện của hàm lượng thuốc trong môi trường.
Việc nghiên cứu khả năng kháng kháng sinh của một nền văn hóa có tầm quan trọng thực tế rất lớn khi cần kê đơn những loại thuốc cần thiết, và quan trọng nhất là hiệu quả cho một bệnh nhân cụ thể. Đây là nơi mà phương pháp nghiên cứu vi khuẩn có thể giúp ích.
Phương tiện tăng trưởng là gì?
Để phát triển và sinh sản, vi khuẩn phải ở trong môi trường dinh dưỡng đã chuẩn bị trước. Theo tính nhất quán, chúng có thể ở thể lỏng hoặc rắn, và theo nguồn gốc - thực vật hay động vật.
Yêu cầu phương tiện cơ bản:
1. Vô trùng.
2. Độ trong suốt tối đa.
3. Các chỉ số tối ưu về độ axit, áp suất thẩm thấu, hoạt tính của nước và các giá trị sinh học khác.
Lấy các thuộc địa cô lập
1. Phương pháp Drygalsky. Nó bao gồm thực tế là một vết bẩn với nhiều loại vi sinh vật khác nhau được áp dụng cho vòng vi khuẩn. Vòng lặp này được truyền dọc theo đĩa Petri đầu tiên với môi trường dinh dưỡng. Hơn nữa, không thay đổi vòng lặp, phương pháp phần dư được thực hiện trên đĩa Petri thứ hai và thứ ba. Vì vậy, trên các mẫu cuối cùng của khuẩn lạc, vi khuẩn sẽ không được gieo hạt quá dày đặc, do đó đơn giản hóa khả năng tìm thấy những con cần thiết cho công việc.vi khuẩn.
2. Phương pháp Koch. Nó sử dụng các ống nghiệm với môi trường dinh dưỡng nóng chảy. Đặt ở đó một vòng lặp hoặc một pipet có phết vi khuẩn, sau đó các chất trong ống nghiệm được đổ lên một đĩa đặc biệt. Agar (hoặc gelatin) đông đặc lại sau một thời gian, và có thể dễ dàng tìm thấy các khuẩn lạc tế bào mong muốn với độ dày của nó. Điều quan trọng là phải pha loãng hỗn hợp vi khuẩn trong ống nghiệm trước khi bắt đầu làm việc để nồng độ vi sinh vật không quá cao.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học, các giai đoạn dựa trên sự phân lập của quá trình nuôi cấy mong muốn của vi khuẩn, không thể thực hiện được nếu không có hai phương pháp này để tìm các khuẩn lạc đã phân lập.
Antibiogram
Bằng mắt thường, phản ứng của vi khuẩn với thuốc có thể được nhìn thấy theo hai cách thực tế:
1. Phương pháp đĩa giấy.
2. Nuôi vi khuẩn và kháng sinh trong môi trường lỏng.
Phương pháp đĩa giấy yêu cầu nuôi cấy vi sinh vật đã được nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng đặc. Trên môi trường như vậy đặt một vài mảnh giấy tròn ngâm thuốc kháng sinh. Nếu thuốc đối phó thành công với sự vô hiệu hóa của các tế bào vi khuẩn, sau khi điều trị như vậy sẽ có một khu vực không có khuẩn lạc. Nếu phản ứng với kháng sinh là âm tính, vi khuẩn sẽ sống sót.
Trong trường hợp sử dụng môi trường dinh dưỡng lỏng, trước tiên, chuẩn bị một số ống nghiệm có cấy vi khuẩn với các độ pha loãng khác nhau. Các chất kháng sinh được cho vào các ống nghiệm này, trong ngày sẽ quan sát được quá trình tương tác giữa chất đó và vi sinh vật. Kết quả là, một kháng sinh đồ chất lượng cao thu được, theo đó có thểđánh giá hiệu quả của thuốc đối với một loại cây trồng nhất định.
Nhiệm vụ chính của phân tích
Ở đây liệt kê các mục tiêu và giai đoạn của phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học.
1. Lấy nguyên liệu ban đầu sẽ được sử dụng để phân lập các khuẩn lạc vi khuẩn. Nó có thể là một vết bẩn từ bề mặt của bất kỳ đồ vật nào, màng nhầy hoặc khoang của cơ quan người, xét nghiệm máu.
2. Nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng đặc. Sau 24-48 giờ, có thể tìm thấy các khuẩn lạc của các loại vi khuẩn khác nhau trên đĩa Petri. Chúng tôi chọn loại mong muốn theo tiêu chí hình thái và / hoặc sinh hóa và tiến hành các công việc tiếp theo với nó.
3. Truyền bá kết quả nuôi cấy. Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học có thể dựa trên phương pháp cơ học hoặc phương pháp sinh học nhằm tăng số lượng vi khuẩn nuôi cấy. Trong trường hợp đầu tiên, công việc được thực hiện với môi trường dinh dưỡng rắn hoặc lỏng, trên đó vi khuẩn nhân lên trong máy điều nhiệt và hình thành các khuẩn lạc mới. Phương pháp sinh học đòi hỏi điều kiện tự nhiên để tăng số lượng vi khuẩn, vì vậy ở đây động vật thí nghiệm bị nhiễm vi sinh vật. Sau một vài ngày, nhiều tế bào nhân sơ có thể được tìm thấy trong mẫu máu hoặc phết tế bào.
4. Làm việc với nền văn hóa tinh khiết. Để xác định vị trí có hệ thống của vi khuẩn, cũng như thuộc về mầm bệnh của chúng, cần phải tiến hành phân tích kỹ lưỡng tế bào theo các đặc điểm hình thái và sinh hóa. Khi nghiên cứu các nhóm vi sinh vật gây bệnh, cần biếtthuốc kháng sinh hiệu quả như thế nào.
Đây là đặc điểm chung của phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học.
Tính năng của phân tích
Quy tắc chính của nghiên cứu vi khuẩn học là vô trùng tối đa. Nếu bạn đang làm việc với các ống nghiệm, chỉ nên tiến hành nuôi cấy và cấy vi khuẩn qua đèn thần được nung nóng.
Tất cả các giai đoạn của phương pháp nghiên cứu vi khuẩn đều cần sử dụng một vòng lặp đặc biệt hoặc một pipet Pasteur. Cả hai dụng cụ đều phải được xử lý sơ bộ trên ngọn lửa đèn cồn. Đối với pipet Pasteur, ở đây, trước khi khử trùng bằng nhiệt, cần phải dùng nhíp bẻ đầu pipet ra.
Kỹ thuật cấy vi khuẩn cũng có những đặc điểm riêng. Đầu tiên, khi cấy trên môi trường rắn, một vòng vi khuẩn sẽ đi qua bề mặt thạch. Tất nhiên, vòng lặp phải có một mẫu vi sinh vật trên bề mặt. Cấy vào môi trường nuôi cấy cũng được thực hiện, trong trường hợp đó, vòng lặp hoặc pipet phải chạm đến đáy đĩa Petri.
Khi làm việc với môi trường lỏng, ống nghiệm được sử dụng. Ở đây, điều quan trọng là đảm bảo rằng chất lỏng không chạm vào các cạnh của dụng cụ thủy tinh hoặc nút đậy bằng thủy tinh trong phòng thí nghiệm và các dụng cụ được sử dụng (pipet, vòng lặp) không chạm vào các vật thể và bề mặt lạ.
Tầm quan trọng của phương pháp nghiên cứu sinh học
Phân tích mẫu vi khuẩn có các ứng dụng thực tế của nó. Chủ yếuphương pháp nghiên cứu vi khuẩn học có thể được sử dụng trong y học. Ví dụ, cần phải nghiên cứu hệ vi sinh của bệnh nhân để thiết lập chẩn đoán chính xác, cũng như phát triển quá trình điều trị chính xác. Một biểu đồ kháng sinh sẽ giúp ích ở đây, sẽ hiển thị hoạt động của các loại thuốc chống lại mầm bệnh.
Phân tích vi khuẩn được sử dụng trong phòng thí nghiệm để phát hiện các bệnh nguy hiểm như bệnh lao, sốt tái phát hoặc bệnh lậu. Nó cũng được sử dụng để nghiên cứu thành phần vi khuẩn của amidan, các hốc nội tạng.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn có thể được sử dụng để xác định độ ô nhiễm của môi trường. Theo dữ liệu về thành phần định lượng và định tính của vết bẩn từ bề mặt của một vật thể, mức độ quần thể của vi sinh vật trong môi trường này được xác định.
