Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm của hầu hết các bệnh truyền nhiễm dựa trên việc phát hiện các kháng thể trong máu của bệnh nhân, được tạo ra để chống lại các kháng nguyên của mầm bệnh, bằng các phương pháp phản ứng huyết thanh học. Họ bước vào hành nghề y tế từ cuối thế kỷ 19 đến đầu thế kỷ 20.
Sự phát triển của khoa học đã giúp xác định cấu trúc kháng nguyên của vi khuẩn và công thức hóa học của chất độc của chúng. Điều này giúp nó có thể tạo ra không chỉ huyết thanh điều trị mà còn cả huyết thanh chẩn đoán. Chúng thu được bằng cách tiêm các mầm bệnh đã giảm độc lực cho động vật thí nghiệm. Sau vài ngày tiếp xúc, máu của thỏ hoặc chuột được sử dụng để điều chế các chế phẩm dùng để xác định vi khuẩn hoặc chất độc của chúng bằng các xét nghiệm huyết thanh học.
Biểu hiện bên ngoài của phản ứng như vậy phụ thuộc vào điều kiện môi trường và trạng thái của kháng nguyên trong máu của bệnh nhân. Nếu các phần tử vi sinh vật không hòa tan, chúng kết tủa, lắng đọng, liên kết hoặc cố định trong huyết thanh. Nếu các kháng nguyên hòa tan, thì hiện tượng trung hòa hoặc kết tủa sẽ xuất hiện.
Phản ứng ngưng kết (RA)
Xét nghiệm ngưng kết huyết thanh học có tính đặc hiệu cao. Nó rất dễ thực hiện và khátrực quan, để nhanh chóng xác định sự hiện diện của kháng nguyên trong huyết thanh của bệnh nhân. Nó được sử dụng để kiểm tra phản ứng Vidal (chẩn đoán sốt thương hàn và phó thương hàn) và Weigl (sốt thương hàn).
Nó dựa trên sự tương tác cụ thể giữa các kháng thể của con người (hoặc các chất ngưng kết) và các tế bào vi sinh vật (các chất gây kết tụ). Sau tương tác của chúng, các hạt được tạo thành kết tủa. Đây là một dấu hiệu tích cực. Các tác nhân vi sinh vật sống hoặc bị giết, nấm, động vật nguyên sinh, tế bào máu và tế bào xôma có thể được sử dụng để thiết lập phản ứng.
Về mặt hóa học, phản ứng được chia thành hai bước:
- Kết nối cụ thể của kháng thể (AT) với kháng nguyên (AG).
- Không đặc hiệu - sự kết tủa của các kết tụ AG-AT, tức là sự hình thành của chất ngưng kết.
Phản ứng ngưng kết gián tiếp (IPHA)
Phản ứng này nhạy hơn phản ứng trước. Nó được sử dụng để chẩn đoán các bệnh do vi khuẩn, ký sinh trùng nội bào và động vật nguyên sinh gây ra. Nó đặc biệt đến mức có thể phát hiện được ngay cả nồng độ kháng thể rất thấp.
Hồng cầu cừu tinh khiết và hồng cầu người đã được xử lý trước bằng kháng thể hoặc kháng nguyên được sử dụng để sản xuất nó (tùy thuộc vào những gì kỹ thuật viên phòng thí nghiệm muốn tìm). Trong một số trường hợp, các tế bào hồng cầu của con người được xử lý bằng các globulin miễn dịch. Phản ứng huyết thanh của hồng cầu được coi là đã xảy ra nếu chúng đã lắng xuống đáy ống. Về một phản ứng tích cựcnói khi các ô sắp xếp theo kiểu ô ngược, chiếm toàn bộ đáy. Phản ứng âm tính được tính nếu hồng cầu xếp thành cột hoặc ở dạng nút ở trung tâm của đáy.
Phản ứng tạo kết tủa (RP)
Phản ứng huyết thanh học loại này được sử dụng để phát hiện các hạt kháng nguyên cực nhỏ. Ví dụ, chúng có thể là protein (hoặc các phần của chúng), hợp chất của protein với lipid hoặc carbohydrate, các bộ phận của vi khuẩn, độc tố của chúng.
Sera cho phản ứng thu được bằng cách lây nhiễm nhân tạo cho động vật, thường là thỏ. Bằng phương pháp này, bạn hoàn toàn có thể nhận được bất kỳ huyết thanh kết tủa nào. Việc thiết lập các phản ứng kết tủa huyết thanh học cũng tương tự như cơ chế hoạt động của các phản ứng ngưng kết. Các kháng thể chứa trong huyết thanh kết hợp với kháng nguyên trong dung dịch keo, tạo thành các phân tử protein lớn được lắng đọng dưới đáy ống hoặc trên chất nền (gel). Phương pháp này được coi là rất đặc hiệu và có thể phát hiện một lượng chất thậm chí không đáng kể.
Được sử dụng để chẩn đoán bệnh dịch hạch, bệnh sốt rét, bệnh than, viêm màng não và các bệnh khác. Ngoài ra, anh ấy còn tham gia vào một cuộc kiểm tra pháp y.
Phản ứng kết tủa gel
Phản ứng huyết thanh học có thể được thực hiện không chỉ trong môi trường lỏng, mà còn trong gel thạch. Đây được gọi là phương pháp kết tủa khuếch tán. Với sự giúp đỡ của nó, thành phần của hỗn hợp kháng nguyên phức tạp được nghiên cứu. Phương pháp này dựa trên phản ứng hóa học của kháng nguyên đối với kháng thể và ngược lại. Trong gel, chúng di chuyểnvề phía nhau với các tốc độ khác nhau và gặp nhau, tạo thành các đường kết tủa. Mỗi dòng là một bộ AG-AT.
Phản ứng trung hòa Exotoxin với antitoxin (PH)
Huyết thanh kháng độc tố có khả năng vô hiệu hóa hoạt động của ngoại độc tố do vi sinh vật tạo ra. Các phản ứng huyết thanh học dựa trên điều này. Vi sinh sử dụng phương pháp này để chuẩn độ huyết thanh, chất độc và chất độc và xác định hoạt tính điều trị của chúng. Sức mạnh trung hòa độc tố được xác định bằng các đơn vị thông thường - AE.
Ngoài ra, nhờ phản ứng này, có thể xác định loài hoặc loại ngoại độc tố. Điều này được sử dụng trong chẩn đoán uốn ván, bạch hầu, ngộ độc thịt. Nghiên cứu có thể được thực hiện cả "trên kính" và trong gel.
Phản ứng ly giải (RL)
Huyết thanh miễn dịch khi đi vào cơ thể bệnh nhân ngoài chức năng chính là miễn dịch thụ động còn có đặc tính ly giải. Nó có khả năng phân giải các tác nhân vi sinh vật, các yếu tố ngoại lai trong tế bào và vi rút xâm nhập vào cơ thể người bệnh. Tùy thuộc vào tính đặc hiệu của các kháng thể có trong huyết thanh, các vi khuẩn, cytolysin, spirochetolizin, hemolysin và các loại khác được phân lập.
Những kháng thể đặc hiệu này được gọi là "bổ thể". Nó được tìm thấy trong hầu hết các chất lỏng của cơ thể con người, có cấu trúc protein phức tạp và cực kỳ nhạy cảm với nhiệt độ tăng, rung lắc, axit và ánh sáng mặt trời trực tiếp. Nhưng ở trạng thái khô nó có thể giữ lạiđặc tính ly giải của nó lên đến sáu tháng.
Có những loại phản ứng huyết thanh kiểu này:
- khử khuẩn;
- tan máu.
Tiệt khuẩn được thực hiện bằng cách sử dụng huyết thanh máu của bệnh nhân và huyết thanh miễn dịch đặc hiệu với các vi khuẩn sống. Nếu có đủ chất bổ sung trong máu, thì nhà nghiên cứu sẽ nhìn thấy dung dịch vi khuẩn, và phản ứng sẽ được coi là dương tính.
Phản ứng huyết thanh học thứ hai của máu là sự huyền phù của các tế bào hồng cầu của bệnh nhân được xử lý bằng huyết thanh có chứa hemolysin, chỉ được kích hoạt khi có một lời khen nhất định. Nếu có, thì trợ lý phòng thí nghiệm quan sát sự hòa tan của các tế bào hồng cầu. Phản ứng này được sử dụng rộng rãi trong y học hiện đại để xác định hiệu giá bổ thể (nghĩa là lượng nhỏ nhất của nó kích thích sự phân giải hồng cầu) trong huyết thanh máu và thực hiện phân tích để cố định bổ thể. Theo cách này, một xét nghiệm huyết thanh học cho bệnh giang mai được thực hiện - phản ứng Wasserman.
Phản ứng cố định bổ sung (CFR)
Phản ứng này được sử dụng để phát hiện kháng thể đối với tác nhân lây nhiễm trong huyết thanh máu của bệnh nhân, cũng như xác định tác nhân gây bệnh bằng cấu trúc kháng nguyên của nó.
Cho đến thời điểm này, chúng tôi đã mô tả các phản ứng huyết thanh học đơn giản. RSK được coi là một phản ứng phức tạp, vì không phải hai, mà là ba yếu tố tương tác trong đó: kháng thể, kháng nguyên và bổ thể. Bản chất của nó nằm ở thực tế là sự tương tác giữa kháng thể và kháng nguyênchỉ xảy ra khi có mặt các protein bổ thể, được hấp thụ trên bề mặt của phức hợp AG-AT đã hình thành.
Bản thân các kháng nguyên, sau khi bổ sung, trải qua những thay đổi đáng kể, điều này cho thấy chất lượng của phản ứng. Nó có thể là ly giải, tán huyết, cố định, diệt khuẩn hoặc kìm hãm vi khuẩn.
Phản ứng xảy ra theo hai giai đoạn:
- Hình thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể mà người giám định không nhìn thấy bằng mắt.
- Thay đổi kháng nguyên dưới tác động của bổ thể. Giai đoạn này thường có thể được theo dõi bằng mắt thường. Nếu phản ứng không thể nhìn thấy bằng mắt thường, thì một hệ thống chỉ thị bổ sung được sử dụng để xác định các thay đổi.
Hệ thống chỉ báo
Phản ứng này dựa trên sự cố định bổ thể. Hồng cầu ram tinh khiết và huyết thanh tán huyết không bổ thể được thêm vào ống nghiệm một giờ sau khi thiết lập RSC. Nếu một phần bổ thể chưa liên kết vẫn còn trong ống nghiệm, thì nó sẽ tham gia vào phức hợp AG-AT được hình thành giữa các tế bào máu cừu và hemolysin, và khiến chúng tan ra. Điều này có nghĩa là RSK là tiêu cực. Nếu các hồng cầu vẫn còn nguyên vẹn, thì phản ứng là dương tính.
Xét nghiệm ngưng kết máu (RGA)
Có hai phản ứng đông máu khác nhau về cơ bản. Một trong số đó là huyết thanh học, nó được sử dụng để xác định nhóm máu. Trong trường hợp này, các tế bào hồng cầu tương tác với các kháng thể.
Và thứ haiphản ứng này không áp dụng cho huyết thanh học, vì tế bào hồng cầu phản ứng với hemagglutinin do virus tạo ra. Vì mỗi mầm bệnh chỉ tác động lên các hồng cầu cụ thể (gà, cừu, khỉ), nên phản ứng này có thể được coi là rất đặc hiệu.
Bạn có thể biết phản ứng dương tính hay âm tính bằng vị trí của các tế bào máu ở đáy ống nghiệm. Nếu mô hình của chúng giống như một chiếc ô ngược thì có nghĩa là vi rút mong muốn có trong máu của bệnh nhân. Và nếu tất cả các hồng cầu đã hình thành như một cột đồng xu, thì không có mầm bệnh mong muốn.
Thử nghiệm ức chế đông máu (HITA)
Đây là một phản ứng có độ đặc hiệu cao cho phép bạn xác định loại, loại vi rút hoặc sự hiện diện của các kháng thể cụ thể trong huyết thanh của bệnh nhân.
Bản chất của nó nằm ở chỗ, các kháng thể được thêm vào ống nghiệm cùng với vật liệu xét nghiệm sẽ ngăn chặn sự lắng đọng của kháng nguyên trên hồng cầu, do đó làm ngừng quá trình đông máu. Đây là dấu hiệu định tính về sự hiện diện trong máu của các kháng nguyên cụ thể đối với loại vi rút cụ thể đang được tìm kiếm.
Phản ứng miễn dịch huỳnh quang (RIF)
Phản ứng dựa trên khả năng phát hiện phức AG-AT bằng kính hiển vi huỳnh quang sau khi xử lý bằng thuốc nhuộm fluorochrome. Phương pháp này dễ xử lý, không cần phân lập mẫu thuần và tốn ít thời gian. Nó không thể thiếu để chẩn đoán nhanh các bệnh truyền nhiễm.
Trong thực tế, những phản ứng huyết thanh này được chia thành hai loại: trực tiếp và gián tiếp.
RIF trực tiếp được sản xuất từkháng nguyên, được xử lý trước bằng huyết thanh huỳnh quang. Và cách gián tiếp là đầu tiên thuốc được xử lý bằng một chẩn đoán thông thường có chứa kháng nguyên cho các kháng thể quan tâm, và sau đó, huyết thanh phát quang, đặc hiệu cho các protein của phức hợp AG-AT, được áp dụng lại, và các tế bào vi sinh vật có thể nhìn thấy dưới kính hiển vi.
