Phương pháp đo màu - phân tích dựa trên sự so sánh độ bão hòa màu của các chất được khảo sát và đã biết. Kết quả của các thử nghiệm vật lý và hóa học có giá trị lớn đối với nhiều ngành khoa học, nhưng hầu hết tất cả các nghiên cứu đều được sử dụng trong y học.
Bản chất của phương pháp so màu
Có nhiều loại xét nghiệm xác định thành phần hóa học của các chất. Một số trong số chúng là phổ quát và được sử dụng rộng rãi trong các lĩnh vực khác nhau, một số khác là cụ thể, với độ chính xác cao hơn. Phương pháp đo màu là phổ biến.
Bản chất của phép phân tích nằm ở chỗ, độ bão hòa màu của dung dịch có nồng độ không xác định được so sánh với màu của dung dịch chuẩn. Trong quá trình phân tích, do sự tương tác của thành phần được khảo sát với một thuốc thử nhất định, một hợp chất có màu được hình thành. Sau khi hoàn thành phản ứng, màu thu được được so sánh với màu của dung dịch, nồng độ của dung dịch đã được biết trước.
Người ta tin rằng người sáng lập ra phép đo màu là Robert Boyle. Anh ấy đã dùng bóptanin để phân biệt sắt với đồng trong dung dịch. Chính Boyle đã nhận thấy rằng nồng độ sắt trong dung dịch càng lớn thì âm sắc của dung dịch càng đậm.
Colorimetry
Phép so màu là phương pháp xác định lượng chất trong dung dịch. Phân tích dựa trên định luật Bouguer-Lambert-Beer: khi một chùm ánh sáng chạm vào lớp hấp thụ dày đặc của một chất, cường độ của nó sẽ yếu đi.
Phương pháp đo màu để xác định nồng độ của một chất có thể sử dụng so sánh trực quan hoặc so sánh bằng các dụng cụ đặc biệt để đo cường độ màu. Sự so sánh được thực hiện một cách trực tiếp và bù đắp.
- Thẳng. Phương pháp liên quan đến việc so sánh mức độ màu của dung dịch thử nghiệm ở một tỷ trọng và nhiệt độ nhất định của chất lỏng với dung dịch đối chiếu. Khi sử dụng quang kế và quang phổ kế, nước cất được sử dụng như một dung dịch đối chiếu. Các thiết bị đo cường độ của dòng điện, phụ thuộc vào cường độ của ánh sáng.
- Đền bù. Phương pháp này dựa trên việc đưa màu của mẫu đã nghiên cứu về màu đối chiếu. Kết quả đạt được bằng cách thêm dung môi hoặc tăng chiều cao của lớp môi trường nhuộm.
Việc sử dụng máy quang phổ, máy đơn sắc và các dụng cụ chính xác khác giúp đơn giản hóa thêm phương pháp nghiên cứu vốn đã đơn giản và cho phép bạn tăng độ chính xác của kết quả. Các thiết bị này có thể đo lượng ánh sáng truyền qua và xác định bước sóng.
Nơi áp dụng phân tích
Phương pháp phân tích so màu được sử dụng khi biết chính xác thành phần hóa học, có mẫu đối chứng để so sánh và nhiệt độ của mẫu thử và mẫu đối chiếu là như nhau. Nếu bạn cần nhanh chóng xác định lượng chất có màu nhưng nó quá nhỏ nên không thể áp dụng phương pháp phân tích.
Phép đo màu được sử dụng rộng rãi trong y học để nghiên cứu sinh hóa lâm sàng và các lĩnh vực khác:
- ngành dược;
- ngành thực phẩm và rượu;
- nông học (xác định chất lượng đất).
Ưu nhược điểm
Phương pháp đo màu, giống như bất kỳ phương pháp nào khác, đều có ưu và nhược điểm.
Những ưu điểm bao gồm những điều sau:
- dễ phân tích, thủ tục chuẩn bị tối thiểu;
- khả năng thử nghiệm ngay cả với một lượng nhỏ vật liệu thử nghiệm;
- không cần thiết bị đắt tiền, mặc dù gần đây các thiết bị hiện đại không hề rẻ được sử dụng ngày càng nhiều. Nhưng chúng cung cấp kết quả chính xác nhất.
Nhược điểm: độ chính xác của phân tích thấp so với các phương pháp phân tích.
Phương pháp Biuret để xác định protein
Protein trong huyết thanh là chỉ số phản ánh tình trạng cân bằng nội môi. Sự gia tăng nồng độ của hợp chất đại phân tử trong máu được gọi là tăng protein máu, hàm lượng thấp được gọi là giảm protein máu.
Protein tronghuyết thanh có thành phần, cấu trúc, tính chất khác nhau, thực hiện các chức năng khác nhau. Chúng được chia thành các enzym, hormone, immunoglobulin và những loại khác. Tất cả các nhóm protein đều có một số đặc điểm chung, trên cơ sở đó người ta đã phát triển các phương pháp để xác định các hợp chất hữu cơ cao phân tử trong chất lỏng sinh học.
Trong tất cả các phương pháp hóa sinh lâm sàng, phương pháp so màu để xác định protein thường được sử dụng nhất. Chúng tương đối rẻ, điều này rất quan trọng đối với các tổ chức ngân sách. và khá đơn giản. Phổ biến nhất là phương pháp biuret. Thực chất của phương pháp: protein trong môi trường kiềm phản ứng với đồng sunfat và tạo thành hợp chất màu tím. Hàm lượng protein trong máu được xác định bởi độ bão hòa của màu nhuộm. Vật liệu sinh học để phân tích được lấy vào buổi sáng khi bụng đói.
Phân tích có độ chính xác cao, nhưng có những yếu tố ảnh hưởng đến nồng độ protein trong máu:
- hoạt động thể chất ngay trước khi lấy mẫu vật liệu sinh học;
- tuần cuối của thai kỳ và cho con bú;
- sử dụng thuốc Corticotropin, Miscleron, Clofibrate làm tăng hàm lượng protein trong máu, và sử dụng Pyrazinamide và estrogen - để giảm nồng độ;
- sai vị trí tay trong quá trình lấy mẫu vật liệu sinh học.
Xác định sắt
Lượng sắt trong máu là một trong những chỉ số chính để chẩn đoán các bệnh khác nhau. Chất này tập trung ở hemoglobin, đảm bảo vận chuyển oxy đến các mô. Vìxác định sắt bằng phương pháp so màu, thường dùng dung dịch bathophenanthroline (0,02%) làm thuốc thử chính. Vật liệu sinh học - huyết thanh không có dấu vết của tán huyết.
Bản chất của phương pháp: sự tương tác của các ion sắt và bathophenanthroline bị sulfat hóa tạo thành một phức chất có màu, độ bão hòa của nó được xác định bằng phương pháp đo quang. Để có được dung dịch trong, cần phải tuân theo các quy tắc lấy mẫu vật liệu sinh học, nhưng để xác định chính xác mật độ quang học của phức hợp sắt-phối tử, sắt được giải phóng từ hemoglobin bằng cách sử dụng hydroxylamine và chất tẩy rửa (natri dodecyl sulfat). Kết quả xét nghiệm xác định sự hiện diện và mức độ của bệnh lý. Nồng độ sắt bình thường phải là:
- 14, 2 - 26.0 µmol / L (nam giới);
- 10, 6- 21, 7 µmol / L (phụ nữ).
Thiếu sắt thường liên quan đến mất máu, ăn uống không đủ chất hoặc kém hấp thu qua đường tiêu hóa.
Kiểm tra cholesterol
Cholesterol là một chất hữu cơ được tìm thấy trong thành tế bào của nhiều sinh vật, bao gồm cả con người. Nó cần thiết cho việc sản xuất cholecalciferol và các hormone steroid. Mức cholesterol từ 3,37-5,2 mmol / L được coi là bình thường. Hàm lượng cao là một trong những nguyên nhân chính gây ra chứng xơ vữa động mạch.
Phương pháp đo màu để xác định cholesterol cho phép bạn nhận biết các bệnh mạch máu ở giai đoạn đầu. Theo kết quả giải phẫu bệnh trong kết quả gây chết người của thiếu máu cục bộ, nồng độ rượu ưa béo ở bệnh nhânlà 6,5-7,8 mmol / L.
Nguyên tắc của phương pháp so màu là cholesterol bị oxy hóa bởi 3beta-hydroxy-steroid oxidoreductase, giải phóng hydrogen peroxide, chuyển đổi p-aminoatipyrine thành một hợp chất có màu. Hàm lượng cholesterol được xác định bởi độ bão hòa của màu sắc của nó.
Khi tiến hành xét nghiệm ở trẻ em, phải lưu ý rằng nồng độ cholesterol trong thời thơ ấu không được vượt quá 4,1 mmol / l.
Phương pháp đo màu bằng enzym là gì?
Thử nghiệm enzym dựa trên việc sử dụng các phản ứng của các enzym có hoạt tính cao. Chúng được sử dụng rộng rãi trong hóa học phân tích để xác định các chất khác nhau - từ các ion nitrat đến các đại phân tử.
Phương pháp enzym (enzym) là phương pháp cụ thể, cho phép phân tích một số chất với sự hiện diện của các chất khác có thành phần tương tự. Các phương pháp phổ biến nhất dựa trên việc sử dụng enzyme - glucose oxidase. Xét nghiệm được sử dụng để xác định nồng độ glucose trong máu. Độ chính xác của xét nghiệm cho phép nó được sử dụng để điều chỉnh liều lượng thuốc hạ đường huyết ở bệnh nhân tiểu đường loại 2.
Phương pháp oxy hóa glucoza được coi là một trong những phương pháp định lượng tốt nhất để xác định glucoza. Cả máu (mao mạch) và huyết thanh đều có thể được sử dụng làm vật liệu sinh học, nhưng huyết tương được ưu tiên hơn vì nó có hàm lượng hematocrit thấp hơn, điều này ảnh hưởng tiêu cực đến độ chính xác của kết quả.
Phương pháp đo quang động học được sử dụng chủ yếu. Bản chất của nó nằm ở chỗtỷ lệ thiết lập của glucose oxidase và peroxidase, trong một khoảng thời gian nhất định sau khi bắt đầu phản ứng, tốc độ hình thành hợp chất có màu sẽ tương ứng với mức glucose trong mẫu. Ưu điểm chính của thử nghiệm là kết quả không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của các hợp chất của bên thứ ba trong mẫu. Phương pháp này cũng có một nhược điểm - cần phải có các dụng cụ đo đắt tiền của các nhà sản xuất Đức hoặc Thụy Điển để thử nghiệm.
Kết
Phương pháp đo màu chính xác và dễ sử dụng. Việc sử dụng nó trong y học cho phép phát hiện sớm những thay đổi bệnh lý khác nhau trong cơ thể. Với sự ra đời của các công nghệ mới, phương pháp này đang được cải tiến và ngày càng trở nên phổ biến hơn.
